金口域言｜1型发作性睡病诊断YYDS：放射免疫法检测食欲素Orexin

　　发现食欲素

　　说起发作性睡病，不得不提到赫赫有名的斯坦福大学，其下属的医学院为了专注探索发作性睡病的病因和治疗，早在20世纪80年代就成立了专门的学术中心——斯坦福发作性睡病中心（The Stanford Center for Narcolepsy），如今已是领域内的世界级领导者，相关文章发表超过300篇，发作性睡病近年的突破进展与它密不可分。

　　猝倒型-发作性睡病（当时的命名，现在定义为I型发作性睡病）是由食欲素-A异常引起的这一重大发现，被誉为过去50年睡眠医学中最重要的里程碑，正是由斯坦福发作性睡病中心主任Emmanuel Mignot博士首次报道，Mignot实验室也因此名声大噪。

　　但别弄错了，Mignot博士是被公认为发现了发作性睡病的病因，却并非发现食欲素的第一人。事实上，这一具有神经活性的生物肽，是1998年由Delecea和Sakurai两个团队几乎同时在动物模型中鉴定出，这也是它有下丘脑分泌素（Hypocretins）和食欲素（Orexin）两个名字的原因。从命名中我们得窥一斑——当时两个团队关注到食欲素在解剖学的定位和对摄食行为的作用，但未与睡眠功能相联想。此后不断有学者尝试了解食欲素的生物功能，直到2000年，Mignot团队凭借敏锐洞察力，基于首创的发作性睡病犬类动物模型，开创性地检测了9名发作性睡病患者脑脊液中的食欲素-A水平，发现其中竟有7名低于检测下限，这才推开了食欲素与发作性睡病研究的大门。

　　放射免疫法

　　Sakurai和Mignot团队采用的食欲素测量方法，正是放射免疫法，这一方法学也成为近二十年来食欲素检测最受推崇的方法学。

　　放射免疫法又叫放射免疫测定法，其原理是利用放射性标记抗原和未标记抗原（待测物）与有限量的特异性抗体竞争性地结合，反应后分离并测量放射性而求得未标记抗原的量。常用于标记抗原的放射性同位素有³H、¹²⁵I、¹³¹I等，检测食欲素用的就是¹²⁵I。

　　放射免疫法检测原理示意图（图源：《免疫学和免疫学检验》）

　　听起来有些复杂？我们打一个简单粗暴的比方：

　　例如，待测标本中有100个食欲素（未标记抗原），无干扰情况下，它们正好能与准备好的100个特异性抗体结合；再往其中加入100个带有¹²⁵I标记的食欲素（已标记抗原），由于抗体数量只有100个，反应后，与抗体结合的变成了50个未标记食欲素和50个¹²⁵I食欲素。根据放射强度的变化，我们就可以推算出未标记食欲素（即待测样本）的含量。

　　放射免疫法的优点很多，如灵敏度高（检测级别可达pg/ml）、特异度高、测量简便，且几乎可测定生物体内任何物质。相比之下，酶联免疫法检测食欲素则容易出现假阳性和假阴性结果。

　　放射免疫法优点

　　敏感性极高：一般化学分析法的检出极限为10^-3~10^-6g，而RIA通常为10^-9~10^-15g；

　　特异性强：良好的特异性抗体能识别化学结构上非常相似的物质，甚至能识别立体异构体，非特异性结合率低；

　　重复性好：操作简便，结果判读客观，受人工影响小；

　　应用范围广：据不完全统计，目前至少已有300多种生物活性物质已建立了RIA法，

　　几乎能应用于所有激素的分析（包括多肽类和固醇类激素)、各类蛋白质、病毒抗原、细菌抗原和药物(如地高辛、毛地黄甙等）的分析。有人预测几乎所有的生物活性物质，只要其含量不低于RIA的探测极限，都可建立适当的RIA法。

　　不过，并非所有实验室都可以开展放射免疫法，根据国家生态环境部的有关规定，只有持辐射安全许可证的单位才能检测。金域医学拥有国内唯一一家通过美国CAP认可的放射免疫室。

　　国际标准建立

　　Mignot博士证实食欲素-A水平与发作性睡病的关系后，发作性睡病研究掀起了新的热潮，但如何将科学研究转化为临床诊疗真正可用的工具？于是2002年，斯坦福大学联合莱顿大学等多家医疗中心发起了一项大型多中心研究。这项前瞻性研究纳入了274名发作性睡病患者和296例对照组（包括健康人和各类神经系统疾病患者），最终得出结论：正常人群脑脊液食欲素水平高于200pg/ml，而脑脊液食欲素水平低于110pg/ml可诊断猝倒型-发作性睡病。

　　这个数字是不是很熟悉？没错，历经许多研究团队共同验证和进一步明确发作性睡病的分类之后，2014年由美国睡眠医学会主编的《国际睡眠障碍分类（第三版）》（ICSD-3）正式将发作性睡病分为1型和2型，并采用了这份数据，将脑脊液中食欲素-A水平≤110pg/ml作为发作性睡病1型的诊断标准之一，生物标志物在发作性睡病的诊治中得到“官方认证”。

　　发作性睡病患者、其他睡眠障碍患者和对照者的脑脊液食欲素水平对比（Mignot等2008年发表于Lancet Neurol）

　　在斯坦福大学发起的这项大型研究里，测量食欲素所用的即是美国凤凰公司（Phoenix Pharmaceuticals）的放射免疫法试剂，因此这一检测方案和临界值（cut-off）被后来的大多数文献研究作为标准沿用。国际顶尖医院梅奥诊所（Mayo Clinic）也采用该方案为临床患者提供服务，值得一提的是，在欧美国家，食欲素-A是几乎所有发作性睡病患者必检项目。

　　金域医学食欲素检测项目

　　金域医学是国内第三方医检行业中率先关注到食欲素检测的实验室，已于2021年开展食欲素检测，和标杆医院梅奥诊所采用凤凰公司同一放射免疫法试剂，用“金标准”方案为客户提供符合国际标准的服务。

　　编辑：李济君

　　统筹：汪东伟

　　编审：干江沄